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流体剪切力实验|通道载玻片串连方法步骤|威尼斯wnsr888

date:2022-07-15 15:12:00

  1.介绍

  

  本应用逐步说明了如何串联连接多个Luer-Slides。优点是仅使用一个流体单元即可观察和培养多个载玻片。当使用相同规格的载玻片时,载玻片中的流速是相同的。也可以通过连接不同高度的载玻片来改变剪切速率(例如,µ-Slide I0.2Luer和µ-Slide I0.4Luer)。

  

  本次介绍了两个载玻片连接的过程。但是它可以应用于大量的载玻片。

  

  2.材料

  

  载玻片:2片 µ-Slides I 0.6Luer, ibiTreat                威尼斯wnsr888 (80186)

  

  细胞:Endothelial cells (2.5 · 105 per slide)          e.g. Promocell

  

  培养基:Endothelial Cell Growth Medium            e.g. Promocell

  

  连接器:Serial Connector                                      威尼斯wnsr888 (10830)

  

  注射器:带简单Luer适配器的无菌注射器(5 ml)

  

  串行连接器:

  

  管道:Silicone Tubing 1.6 mm ID                           威尼斯wnsr888 (10842)

  

  适配器:Luer Connector Male                                 威尼斯wnsr888 (10824)

  

  将一个塑料连接器插入通道载玻片的两端(6厘米),以在载玻片之间连接起来。下图是在两端带有两个配套的Luer公接头的连接器管。可用乙醇或高压灭菌消毒接头。

  

60.png

  

  必须在无菌条件下执行以下步骤!

  

  3. 播种细胞

  

  · 准备1.67 · 106 cells/ml.的细胞悬液。

  

  · 将150 µl注入通道。仅填充通道体积(图1a)。

  

  · 将帽盖在Luer接头上,并将载玻片放在培养箱中培养半小时来固定细胞。

  

  · 细胞固定后,将两边储液接口各加60 µl充满。

  

  4. 连接载玻片

  

  现在准备载玻片,使细胞在通道中生长,并向储液池中填充60 µl无细胞培养基(请参见第3节)。

  

  · 在连接之前,将所有储液器各加60 µl(图1b)。

  

  · 将连接器管的一个Luer适配器插入载玻片的一个母Luer适配器中(图1c)。

  

  · 将一些预备的培养基吸入注射器。倒转注射器并将多余的空气推出(图1d)。

  

  · 使用没有气泡的注射器在载玻片端口注入。可能会有些溢出(图1e)。

  

  小心地将液体注入载玻片,直到连接器管中充满为止(图1f)

  

78.png

  

  图1:(a)接种细胞时的用量; (b)载玻片在连接之前已完全填满; (c)载玻片中插入连接管; (d)无气泡的注射器; (e)将注射器插入载玻片一端; (f)用注射器推动介质来填充连接器管道

  

  · 当连接器管道完全充满时(图2a),将其插入第二张载玻片的接口上(图2b-d)。

  

  · 如果要连接两个以上的载玻片,将第二个连接器管放在第二个载玻片空的另一端口上,用注射器推入介质,依此类推。

  

  · 慢慢连接的所有载玻片将注射器从适配器上卸下(图2e)。

  

  · 要将载玻片连接到灌注套件,两个Luer容器必须在顶部填充培养基。可用纸巾擦去过多的培养基。

  

77.png

  

  图2:(a)连接管已完全充满; (b-c)将连接器管插入第二载玻片的鲁尔接头上; (d)带有适配接头管连接; (e)取下注射器; (f)擦去溢出的介质,并填充储液罐以连接到灌注套件。

  

  5. 连接到灌注装置

  

  将载玻片连接到灌注套件

75.jpg

  图片串联安装带有两个µ-Slides I Luer的一个流体单元

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