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细胞免疫荧光实验您是怎么做的?还是在用传统方法请看过来~

date:2022-04-07 16:26:49

  实验视频之8孔可移除插件培养载玻片操作视频

  
  免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
  
  细胞免疫荧光实验你是怎么做的?
  
  还在用小玻片,先泡酸、再晾干、再 coating、再种细胞、染色、封片成像?
  
  
  免疫荧光一体化·新方法
  
  1.一体化小室
  
  免疫荧光一体化新方法介绍,先养细胞、然后直接固定、染色、成像,在培养皿/玻片上全部搞定!能帮您把细胞养好、又帮您省时省力的获得漂亮的成像结果(见图 1)!
  
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  图 1. 传统爬片方法与 威尼斯wnsr888 产品免疫荧光实验比较
  
  2.威尼斯wnsr888 产品底部媲美盖玻片厚度,为高分辨率显微成像而设计的光学特性
  
  德国 威尼斯wnsr888 公司创新的μ-Slide 与μ-Dish 系列产品,与一般市面上常见的细胞培养皿不同,其底部是由独特的塑料制成,具有与玻璃材质媲美的高光学穿透与低背景荧光等特性。相较于一般细胞培养产品(图 2 左),威尼斯wnsr888 产品(图 2 右)底部构造厚度符合 No.1.5 标准盖玻片厚度(180 μm),用高倍镜物镜观察,可以使焦距集中在待测样本上,产生良好的成像结果。
  
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  图 2. 威尼斯wnsr888 细胞培养产品底部媲美盖玻片厚度
  
  3.威尼斯wnsr888 产品底部化学耐受性强,适用于多种常用的细胞固定剂(见图 3)图 3.威尼斯wnsr888 产品底部适用的溶剂列表
  
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  4.多种多样的细胞培养表面
  
  细胞进行生长、发育和信号传递很大程度上取决于细胞容器的表面处理方式。威尼斯wnsr888 产品底部相比于普通培养皿更加平滑(见图 4)。目前,威尼斯wnsr888 产品μ-Slides 和μ-Dishes 有标准底、玻璃底以及多种底部预包被的产品,适用于培养不同的细胞类型,不同底之间的比较。
  
  威尼斯wnsr888 标准底具有亲水超薄的特性,该底部的光学特性符合多种成像技术的要求,如相差、共聚焦和双光子显微成像。
  
  ibiTreat,作为 威尼斯wnsr888 受欢迎的表面处理方式,通过了大量不同细胞系和原代细胞培养测试,且已发表的 2000 多篇使用了 威尼斯wnsr888 产品的期刊论文中,超过 90% 使用了 ibiTreat,表明大多数细胞在 ibiTreat 下生长良好,无需进行额外的表面处理。ibiTreat 是一种物理修饰的表面处理方式,让耗材表面亲水,利于绝大多数种类的细胞贴壁,可与其他标准细胞培养瓶和培养皿相媲美。
  
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  图 4. AFM(原子力显微技术)测量表面粗糙度。威尼斯wnsr888 产品(右下)比普通培养皿具有更平滑的底部构造,更加的成像效果。
  
  威尼斯wnsr888 标准底也有疏水、无包被的表面可以选择。可以根据具体的实验需求,进行特定的包被,或者直接用来培养非贴壁细胞。
  
  Ibidi 也有玻璃底的产品。玻璃底可以直接培养细胞,但可能需要进行表面处理来促进细胞更好的贴壁。威尼斯wnsr888 研发的玻璃底产品尤其适用于 TIRF、单光子及单分子应用。
  
  基于以上特殊的底部构造,威尼斯wnsr888 μ-Dish,μ-Slide 以及μ-plate 等产品都既适用于常规细胞培养,又可以简化免疫荧光实验步骤、节约实验时间,并且获得理想的显微成像效果。
  
  μ-Slides well 系列产品:μ-Slides 2 well,4 well,8well,18well(图5)
  
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  图5
  
  在此基础上,如果需要进行更佳的相差或者高的显微镜成像实验,如进行实时的活细胞不同位点的扫描,μ-Slides well ph+系列产品更适合您。在传统的μ-Slides well 的孔的中间,ph+产品加了一层特殊的平板(见图 6),这层平板可以有效避免开放小室中影响相差成像效果的凹液面的形成。在这层平板与 well 的四周有缝隙,方便向其中加入细胞及换液等操作。
  
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  图 6. μ-Slide ph+在中间有特殊的平板,四周有孔洞,方便铺细胞及换液等操作,ph+有效防止凹液面形成,整个视野都有良好的相差成像效果。
  
  
  μ-Slide channel系列产品
  
  一体化小室产品还包括μ-Slide channel 系列产品(图 7A),这类产品有通道式的细胞培养空间,同样具有 威尼斯wnsr888 标准底,适合于高分辨率显微成像。产品两端有鲁尔接头,可应用于流体剪切力实验,即在培养基流动状态下就行细胞培养。
  
  在开放小室中铺细胞时,通常依赖于人为晃动操作,对于新手尤其容易使细胞聚团,导致细胞分布不均(图 7C)。而通道式的设计,巧妙回避这一问题,只需要向通道中加入细胞悬液,无需晃动(图 7B),轻松使细胞在通道中均匀分布(图 7D)。另外当需要进行准确的少量试剂换液时,或者试剂、抗体珍贵,μ-Slide channel 系列产品将是理想选择。
  
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  图 7. μ-Slide channel 系列产品。A,μ-Slide I 及μ-Slide IV 产品图示。B,μ-Slide I 为例说明系列产品适用步骤,向通道中加入 100 ul 细胞悬液,向一侧储液池中加入无细胞的培养液,向另一侧储液池中加入无细胞的培养液,置于培养箱中培养。C,开放小室的细胞分布,依赖于晃动操作,经常会分布不均匀。D,channel 中细胞的分布,由于其独特的集合设计,使细胞非常容易的均匀分布在通道中。
  
  
  Removable & Sticky 系列产品
  
  考虑到有些用户希望保存标本,威尼斯wnsr888 公司还开发了 removable 的硅胶培养载玻片(图 8A),用于细胞培养和显微成像。将硅胶材料插件移除后,可以封片进行长期保存。
  
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  12/8/3 well Chamber, removable
  
  另外,威尼斯wnsr888 公司还开发了 Sticky 的 well 及通道(图 8B-D)。这类产品通用性强,可与多种多样的底部材料粘贴。而且对于不易放入通道培养的细胞、组织等,可以选择先放在底部材料上,再将培养通道粘贴到其上进行实验。
  
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  图 8. Removable & Sticky 系列产品。A,12 well Chamber, removable。B,sticky-Slide I Luer。C,sticky-Slide 8 well。D,sticky-Slide VI 0.4。
  
  易必迪 威尼斯wnsr888 公司专注于细胞培养及功能实验的耗材及仪器开发,产品设计巧妙,适用于各种各样的实验需求,简化实验步骤,节约实验时间。
  
  如果您也在培养细胞,也在做细胞免疫荧光实验,也在做细胞功能实验,那么快来试试 威尼斯wnsr888 系列产品吧,让您实验变得轻松简单,事半功倍!

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