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威尼斯wnsr888简易快速一体化的免疫荧光染色,仅需少量的细胞和试剂就可以完成

date:2022-01-13 10:50:18

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威尼斯wnsr888 µ-Slide18孔载玻片

  

  使用威尼斯wnsr888 µ-Slide 18孔载玻片培养,固定和染色贴壁细胞的简单方案。在此示例中,我们培养了人内皮细胞,用低聚甲醛固定了它们,并对F-actin细胞骨架和表达α-微管蛋白的微管进行了染色。细胞核用DAPI复染。

  

  该应用包括四个主要步骤:

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  准备实验材料如下:

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  详细步骤如下:

  

  01培养

  在无菌条件下打开威尼斯wnsr888 µ-Slide 18孔ibiTreat(81816)的包装,并将其放在µ-Slide机架(80003)上。

  准备细胞悬液(1 x 105cell/ ml),并在µ-Slide 18孔的每个孔中加100 µl。

  用提供的盖子盖上腔室。

  在潮湿的细胞培养箱(37°C,5%CO2)中培养过夜。对于更长的细胞培养,我们建议几天后进行中等程度的交换。

  

  02固定,透化和封闭

  使用移液器装置从孔中吸出细胞培养基。

  用Dulbecco PBS冲洗细胞,方法是将100 µl缓慢加入每个孔。

  用约100 µl 4%多聚甲醛固定细胞20分钟。

  用PBS冲洗细胞两次,方法是将100 µl缓慢加入每个孔中。

  除去液体,并在PBS中加入约100 µl的0.1%Triton®X-100。孵育10分钟。

  用PBS洗涤细胞,缓慢将100 µl加入每个孔中。

  除去液体,并在PBS中加入100 µl 1%BSA封闭溶液。孵育20分钟。

  用PBS洗涤细胞,缓慢将100 µl加入每个孔中。

  

  03染色

  准备您的染色抗体溶液。

  使用移液器装置从孔中吸出所有液体。

  将100μlPBS稀释的一抗(抗-Tubulin 1:1000)稀释到每个孔中,并在4°C下孵育过夜。

  用PBS洗涤细胞一次,持续10分钟。

  将100 µl PBS稀释的二级抗体混合物(抗小鼠IgG-Atto594 1:500和LifeAct-TagGFP2蛋白30 µg / ml)稀释到每个孔中,并在室温下于黑暗中孵育3小时。。

  用PBS洗涤细胞两次,每次10分钟。

  吸出PBS,并在每个孔中加入约100 µl含DAPI的威尼斯wnsr888封固剂。使用滴管瓶滴加安装介质。

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  04显微镜检查

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  在荧光显微镜下用合适的滤光片组观察细胞,可选择用威尼斯wnsr888浸油(50101)观察细胞。

  (可选)覆盖图像以创建合并图像。

  

  05结果

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  接种在µ-Slide 18孔,ibiTreat,物镜60x,24小时后的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)。

  绿色:F-肌动蛋白(LifeAct-TagGFP2蛋白)

  红色:微管蛋白(单克隆抗α-Tubulin抗体,小鼠+抗小鼠IgG-Atto594)

  蓝色:细胞核(使用具有DAPI的威尼斯wnsr888 Mounting Medium进行DAPI染色)

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